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非洲豬瘟病毒LAMP熒光檢測試劑盒

作用與用途】 本試劑盒采用環介導等溫擴增技術,用于檢測豬口鼻拭子、扁桃體、脾臟等組織樣品和血清中的非洲豬瘟病毒核酸DNA,檢測結果可用于非洲豬瘟病毒感染的輔助診斷。 【試劑盒組成】 試劑名稱 規格及數量(48T) 備注 ASFV 熒光反應液(A) 624ul /管 ASFV 熒光反應液(B) 432ul /管 酶反應液 48 ul/管 陽性對照 60 ul/管 陰性對照 100 ul/管 【適用設備】恒溫熒光擴增儀。 【樣品前處理】 1、將樣本(全血、組織研磨液、拭子等)上清10 ul加入到1.5 ml離心管中,加入100 ul Solution A,渦旋震蕩20 s,室溫靜置3-5 min(或95℃金屬浴振蕩孵育3-5 min)。 2、樣本充分裂解后(95℃金屬浴振蕩孵育的樣本需恢復室溫),加入100 ul Solution B,并渦旋震蕩30 s。 3、處理后的樣本如在2小時內進行下一步試驗,請于4℃保存,如不能立即進行下一步試驗,請于-20℃保存。 【檢測方法】 1試劑準備(在試劑準備區進行) 1.1在室溫下解凍保存于-20℃的各試劑,解凍后立即置于冰上保存。 1.2試劑配制(每份量反應mix的配置) 試劑 體系 AFSV熒光反應液(A) AFSV熒光反應液(B) 13×(n+1) μl 9×(n+1) μl 酶反應液 1×(n+1) μl 合計 23×(n+1) μl 混合注意事項:渦旋混合器混合時采用1秒×3次的方式;旌线^于激烈,則有可能導致酶失活。 1.3將上述準備好的試劑轉移至樣本處理區,待用。 2樣本處理及加樣(在樣品處理區進行) 2.1根據待測樣本、陰性對照、陽性對照的數量準備反應管,向每個反應管加入23ul反應Mix。 2.2吸取已處理的樣本DNA、陰性對照、陽性對照各2ul加入對應反應管,蓋好管蓋,轉移至擴增區。 加樣注意事項:依次加入陰性對照并蓋好、樣本DNA并蓋好、陽性對照并蓋好。 3 LAMP檢測(在核酸擴增區進行) 3.1將PCR反應管放入恒溫熒光擴增設備。 3.2設置反應體系為25ul; 步驟 溫度 時間 備注 1 擴增 63℃ 50min 83℃熱蓋(若無此功能則忽略) 上機后注意事項:請不要打開試管蓋,防止核酸污染實驗室。 4結果判讀 5.1質量控制:50分鐘內陰性對照無擴增曲線、陽性對照有明顯擴增曲線。 5.2 結果判讀:50分鐘內待測樣本有明顯擴增曲線判為陽性;否則判為陰性。 【注意事項】 1、請務必在-20℃保存本試劑盒,避免沒有必要的凍融操作。 2、試劑室溫解凍,制備與保存請在冰上進行。 3、避免劇烈渦旋振蕩,防止酶失活 4、實驗結束后,避免開蓋,防止污染實驗室。 5、試劑配制與陽性樣本分區操作。
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